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　　1.哪些特定應(yīng)用使用µ-Slide VI ^0.1？

　　如果實驗中的細(xì)胞數(shù)量有限(例如當(dāng)使用原代小鼠細(xì)胞時)，或者使用最少量的試劑做進(jìn)行免疫熒光，建議使用µ-Slide VI ^0.1 。對于灌注實驗，µ-Slide VI ^0.1 會產(chǎn)生最高水平的剪切應(yīng)力。

　　2. µ-Slide內(nèi)的流型是Y型湍流嗎？

　　不是，當(dāng)使用標(biāo)準(zhǔn)流速和水性介質(zhì)時，在小通道中無法真正實現(xiàn)湍流特性。無量綱雷諾數(shù)(Re)用于表征不同的流型。層流發(fā)生在低雷諾數(shù)，而湍流發(fā)生在高雷諾數(shù)。表明管道和生物容器中層流的臨界雷諾數(shù)是Re=2000。雷諾數(shù)超過Re 4000，最有可能代表湍流。即使在 µ-Slide y-shaped中流速非常高（60毫升/分鐘），雷諾數(shù)仍非常低，約為Re=200，表明層流。

　　3.多大的剪切應(yīng)力適合于滾動和粘附分析？

　　在滾動和粘附分析中，應(yīng)該使用與內(nèi)皮細(xì)胞層的標(biāo)準(zhǔn)流動調(diào)節(jié)相同的參數(shù)。有兩件事需要考慮: 首先，在進(jìn)行滾動和粘附實驗之前，內(nèi)皮細(xì)胞層應(yīng)該進(jìn)行幾天的流動調(diào)節(jié)。這個階段的剪切應(yīng)力可能不同于在滾動和粘附期間施加的剪切應(yīng)力。其次，在粘附試驗中，灌注培養(yǎng)基的速度也起作用。可能需要改變剪切應(yīng)力。此外，有必要測試最佳流速/剪切應(yīng)力。

　　4.為什么我的細(xì)胞在流動條件下沒有拉長？

　　內(nèi)皮細(xì)胞的生理形狀在不同類型的血管中差異很大。并非所有類型的內(nèi)皮細(xì)胞在其生理環(huán)境中都被拉長。

　　例如，HUVEC在血流的第一階段伸長。為了覆蓋整個表面，細(xì)胞通過在流動方向上伸長來增加它們的表面。在此流動期之后，細(xì)胞層生長成定向鵝卵石圖案，不再顯示顯著的伸長。

　　5.在進(jìn)行分析之前，應(yīng)該對細(xì)胞層施加多長時間的剪切應(yīng)力？

　　細(xì)胞對機械剪切應(yīng)力的適應(yīng)性反應(yīng)可長達(dá)數(shù)天。因此，根據(jù)您正在研究的標(biāo)記，可能有必要在分析前對細(xì)胞層進(jìn)行長達(dá)幾天的調(diào)節(jié)。我們建議在長期實驗中測試感興趣的參數(shù)，以確定最佳的測量時間點。

　　6.應(yīng)該對內(nèi)皮細(xì)胞施加多大的剪切力？

　　生理剪切應(yīng)力取決于感興趣的組織和血管類型。根據(jù)文獻(xiàn)，人體內(nèi)的生理剪切應(yīng)力值在0至60dyn/cm²之間變化。在開始實驗之前，確定適用于所用細(xì)胞類型的相關(guān)剪切應(yīng)力范圍至關(guān)重要。有關(guān)剪切應(yīng)力對細(xì)胞影響的更多信息，請點擊查看這里（這是個鏈接2023-03-10發(fā)布的公眾號）。

　　7.如何增加流動分析中的細(xì)胞數(shù)量？

　　將通道載玻片串聯(lián)到一個灌流裝置/流體單元中，可以輕松地增加流式檢測中細(xì)胞的數(shù)量。應(yīng)用說明書25（這是個鏈接2022-07-15發(fā)布的公眾號）提供了連接多個通道載玻片到一個流體單元的詳細(xì)方案。 此外，將細(xì)胞播種到通道底部和頂部，也可以增加通道中的細(xì)胞數(shù)量。

　　8.在開始流動之前，細(xì)胞應(yīng)該附著多久？

　　在流動開始之前，細(xì)胞必須緊密附著在通道載玻片底部。附著時間取決于細(xì)胞類型、培養(yǎng)基添加物和表面。例如，在膠原涂層表面上使用HUVEC時，附著時間只需半小時。之后，就可以施加剪切應(yīng)力。為了使細(xì)胞有機會適應(yīng)新的環(huán)境條件，建議逐步增加剪切應(yīng)力。關(guān)于HUVEC的詳細(xì)信息請參閱應(yīng)用說明13（這是個鏈接2022-08-24發(fā)布的公眾號。 

　　9.硅珠如何再生？

　　將硅膠珠加熱即可輕松再生。請按照ibidi泵系統(tǒng)的說明書中的方案進(jìn)行回收。

　　10.灌注裝置多久可以重復(fù)使用一次？

　　我們不建議重復(fù)使用灌注組件。每次實驗都使用一個新的灌注裝置，可獲得最可復(fù)制和最可靠的結(jié)果。您可以在ibidi泵系統(tǒng)說明書中找到有關(guān)滅菌和清潔的其他信息。 

　　11.如何確保細(xì)胞獲得孵化后的空氣？

　　ibidi泵系統(tǒng)的設(shè)置確保來自培養(yǎng)箱內(nèi)部的具有正確CO2濃度的無菌空氣驅(qū)動灌注。有關(guān)詳細(xì)說明，請參見ibidi泵系統(tǒng)的說明書。 

　　12.如何計算通道載玻片中懸浮細(xì)胞的剪切應(yīng)力？

　　在通道中通過液體時，壁面摩擦?xí)?dǎo)致流動速度呈拋物線形。通道中心的流速將比壁面快。剪切應(yīng)力僅在通道或管道的壁面上發(fā)生。因此，只有附著在通道壁/底部的細(xì)胞才會經(jīng)歷剪切應(yīng)力。通道中央的懸浮細(xì)胞將經(jīng)歷不同的流速，與靠近通道壁的細(xì)胞不同。因此，對于懸浮細(xì)胞，剪切速率是需要考慮的相關(guān)因素，而不是剪切應(yīng)力。